深圳庫貝爾生物自主研發生產55項生化試劑，包括腎功、肝功、特種蛋白、血脂、心肌、胰腺、電解質及無機離子類、風濕類、糖代謝類試劑，歡迎致電咨詢400-834-4188、400-635-0600

一、生化試劑的分類

(一)按照化學性質分類

1. 酶類：包括ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE等。

2.底物/代謝產物類：包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,UREA,Cr,Glu,TP,Alb,T-Bil,TBA,NH4+,CO2等。

3.無機離子類：包括Ca,P,Mg,Cl等。

4.特種蛋白類：包括apoAl,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子)，IgG,IgA,IgM等。

(二) 按照臨床應用分類

1.無機離子：包括Ca，P，Mg，Cl等。

2. 肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。

3.腎功能：UA，UREA，Cr等。

4.心肌酶譜：CK，CK-MB，LDH，α-HBDH，AST，MSO。

5. 糖尿?。?/span>GLU等。

6.前列腺疾?。?/span>ACP，p-ACP等。

7.胰腺炎：α-AMY。

8.血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。

9.痛風：UA。

10.有機磷中毒：ChE。

11.免疫性疾?。?/span>C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM，Kappa鏈，Lambda鏈。

二、反應速度特性

按照反應速度，可以分為終點法試劑和動力學試劑。而動力學試劑又可再分為零級動力學法和一級動力學法。

(一) 終點法試劑

終點法，指經過一段時間(一般為幾分鐘)的反應，反應進行到完全，使全部底物(被測物)轉變成產物，稱終點法，更確切地說應稱平衡法，這是最理想的分析類型。如圖（1）。

整個反應達到平衡，由于正向反應的平衡常數很大，可認為所有的被測定物已轉變為產物，反應液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度與被測定物的濃度成正比。

終點法對反應條件(如酶量、pH、溫度)小的改變不敏感，只要這種改變不影響在一定時間內反應達到平衡即可，是最理想的反應模型。

圖（1）

屬于終點法的試劑主要有：

TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，Cr（氧化酶法），NH₄⁺，CO2 ， Ca，P，Mg，Cl ， apoA1，apoB，Lp(a)，C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM等。

(二)動力學法試劑

1.零級動力學法

零級動力學法，指反應過程中反應速度維持不變，達到最大，與底物濃度無關，因此，在整個反應過程中，反應物可以勻速地生成某個產物，導致被測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（△A/min）與被測物的活性或濃度成正比，主要用于酶活性的測定。如圖（2）。

實際上，由于底物濃度不可能足夠大，隨著反應的進行，底物消耗到一定程度后，反應速度不再維持不變，同樣從啟動反應到達到最大速度需要一定時間。因此，零級動力學法是針對特定時間而言的，各試劑商對這段時間有嚴格規定。

圖（2）

屬于零級動力學法的試劑主要有：

ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，α-HBDH，LDH，CK，CK-MB,α-AMY，MSO，ADA，ChE，TBA等。

2.一級動力學法

在一定的反應時間內，反應速度與底物濃度的一次方成正比，由于底物在不斷的消耗，因此整個反應的速度在不斷的減少，表現為吸光度的增加（或降低）速度越來越小，這類反應達到平衡的時間很長，理論上可以在任意時間段進行監測，但由于血清成份復雜，反應剛啟動時反應較復雜，雜反應較多，經過一段延遲時間才能進入穩定反應期，必需在特定時間段內進行監測，各試劑商對這段時間有嚴格規定。如圖（3）。

在一固定時間間隔中，底物濃度的變化量正比于底物的初濃度，這是一級反應的同性。該段時間內吸光度的增加或降低與被測物的濃度成正比。

圖（3）

屬于一級動力學法的試劑主要有：

Cr（苦味酸法），UREA（紫外監測法）

三、顯色原理

顯色系統主要有以下幾種：

?  NAD-NADH和NADP-NADPH系統

?  p-NP和p-NA系統

?  H2O2偶聯的指示系統

?  抗原抗體反應指示系統

?  其它顯色反應

(一)  NAD-NADH和NADP-NADPH系統

NADH和NADPH在340nm有特征性吸收峰，而NAD和NADP在340nm無特征性吸收峰，利用其偶聯的脫氫酶(工具酶)反應，根據340nm吸光度的變化，可以測定物質的濃度或活性。

作為該指示系統常用的工具酶有LDH、MDH、GLDH和G6PDH

目前利用此指示系統進行測定的臨床項目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH 、Glu、UREA、NH4+ 、CO2等。

(二)  p-NP和p-NA系統

p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根據405nm吸光度的變化，可以測定物質的濃度或活性。

目前利用此指示系統進行測定的臨床項目有ALP、ACP、r-GT、AMY等。

(三)  H2O2偶聯的指示系統

H2O2在過氧化物酶的作用下，可使單一個或成對的無色的色素原氧化成有色的色素，導致某一波長吸光度的增加，因此可用來測定物質的濃度或活性

用于此指示系統的單一色素原有TMB、ABTS等；成對色素原有酚和4AA、MBTH和DMA等。

目前利用此指示系統進行測定的臨床項目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu、Cr、UA等。

(四)  抗原抗體反應指示系統

特異性抗體與抗原(待測物質)在相應的緩沖環境下反應生成抗原抗體復合物，形成一定的濁度，導致特定波長透光率的改變。在抗體過剩的前提下，改變程度與抗原濃度成正比。

目前利用此指示系統進行測定的臨床項目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等。

(五)其它顯色反應

蛋白質中的肽鍵在堿性溶液中能與銅離子作用產生紫紅色絡合物，在一定濃度范圍內顏色反應強度與蛋白質的濃度成正比。用于TP的測定。

溴甲酚綠(BCG)在非離子去污劑Brij－35的存在下，可與白蛋白形成緊密結合的綠色復合物。用于Alb的測定。

重氮苯磺酸鹽與膽紅素生成紅紫色偶氮膽紅素。用于總膽紅素和直接膽紅素的測定。

甲基麝香草酚蘭(MTB)在堿性條件下可與Ca、Mg形成有色絡合物。用于Ca、Mg的測定。

四、性能評價方法

(一)主要性能指標：

1.穩定性：指在規定條件下經過一段時間的保存，仍能達到相應的性能指標，如試劑空白吸光度、線性范圍、靈敏度等。

2.反應靈敏度：指單位濃度(或活性)的測定物反應所產生的反應度，反應度越高，靈敏度越大。

3.精密度：結果間相互符合的一致程度

4.準確度：與參考測定程序結果的一致性

5.線性范圍：在規定的重復性和線性偏差下，測得的濃度或活性值與設定的濃度或活性值之間的比例關系的范圍。

6.基質效應：基質指的是樣品中被分析物以外的組分?；|常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，并影響分析結果的準確性。例如，溶液的離子強度會對分析物活度系數有影響，這些影響和干擾被稱為基質效應（matrix effect）。

7.抗干擾性：

8.其它：試劑/樣本比例、反應時間、價格等。

(二)性能評價方法

1. 穩定性：連續觀測，每日試驗；熱加速試驗。

2.反應靈敏度：直接計算單位濃度反應物的吸光度變化或變化率。

3. 精密度：按照NCCLS EP5-A進行。

4.準確度：按照NCCLS EP9-A2 進行。

5. 線性范圍：按照NCCLS EP6-A 進行。

6.基質效應：通過回收試驗確定

7. 抗干擾性：按照NCCLS EP7-A進行。